Diagnosis differentialis nodulorum pulmonalium per tomographiam computatam (CT) identificatorum in praxi clinica adhuc difficilis est. Hic, metaboloma globale 480 exemplorum serorum, inter quos sunt testiones sani, noduli pulmonales benigni, et adenocarcinoma pulmonis stadii I, describimus. Adenocarcinomata perfiles metabolomicos singulares exhibent, dum noduli benigni et individua sani similitudinem magnam in perfilibus metabolomicis habent. In grege inventionis (n = 306), series 27 metabolitorum identificata est ad distinguendum inter nodulos benignos et malignos. AUC (Area sub curva) exemplaris discriminantis in gregibus validationis internae (n = 104) et validationis externae (n = 111) 0.915 et 0.945 respective erat. Analysis semitarum revelavit metabolitos glycolyticos auctos cum tryptophano diminuto in sero adenocarcinomatis pulmonis comparato cum nodulis benignis et testionibus sanis consociatos, et suggessit absorptionem tryptophani glycolysim in cellulis cancri pulmonis promovere. Studium nostrum utilitatem bioindicatorum metabolitorum serorum in aestimando periculo nodulorum pulmonalium per tomographiam computatam detectorum illustrat.
Diagnosis praecox maximi momenti est ad augendas rationes supervivendi aegrotorum cancro. Experimentum Nationale Examinationis Cancri Pulmonis in Civitatibus Foederatis Americae (NLST) et Studium NELSON Europaeum demonstraverunt examinationem per tomographiam computatam dosis humilis (LDCT) mortalitatem cancri pulmonis in coetibus periculi alti significanter reducere posse1,2,3. Ex quo usus LDCT ad examinationem cancri pulmonis late diffusus est, incidentia inventionum radiographicarum fortuitarum nodulorum pulmonalium asymptomaticorum crescere perrexit4. Noduli pulmonales definiuntur ut opacitates focales usque ad 3 cm in diametro5. Difficultates habemus in aestimanda probabilitate malignitatis et tractando magno numero nodulorum pulmonalium fortuito in LDCT detectorum. Limitationes CT ad frequentes examinationes subsequentes et eventus falso positivos ducere possunt, quod ad interventionem inutilem et curationem excessivam6 ducit. Ideo necesse est bioindices certos et utiles evolvere ad recte identificandum cancrum pulmonis in primis stadiis et distinguendos nodulos benignos plurimos in detectione initiali7.
Comprehensiva analysis molecularis sanguinis (seri, plasmatis, cellularum mononuclearium sanguinis peripherici), inter quas genomica, proteomica vel methylatio DNA8,9,10, ad crescentem studium in inventione biosignatorum diagnosticorum pro cancro pulmonis perduxit. Interea, modi metabolomici producta finalia cellularia metiuntur, quae ab actionibus endogenis et exogenis afficiuntur, ideoque ad praedicendum initium et exitum morbi adhibentur. Chromatographia liquida-spectrometria massae tandem (LC-MS) est methodus late adhibita pro studiis metabolomicis propter suam magnam sensibilitatem et magnum ambitum dynamicum, qui metabolitas cum diversis proprietatibus physicochemicis11,12,13 comprehendere potest. Quamquam analysis metabolomica globalis plasmatis/seri ad identificandos biosignatores cum diagnosi cancri pulmonis14,15,16,17 et efficacia curationis consociatos adhibita est,18 classificatores metabolitorum serorum ad distinguendum inter nodulos pulmonales benignos et malignos adhuc multum studendi manent. - investigatio ingens.
Adenocarcinoma et carcinoma cellulae squamosae duo subtypi principales cancri pulmonis non parvocellularis (NSCLC) sunt. Varia experimenta tomographia computata (CT) indicant adenocarcinoma esse genus histologicum cancri pulmonis frequentissimum1,19,20,21. In hoc studio, chromatographia liquida ultra-performance-spectrometria massae altae resolutionis (UPLC-HRMS) usi sumus ad analysin metabolomicam in summa 695 exemplaribus serici perficiendam, inclusis subiectis sanis, nodulis pulmonaribus benignis, et subiectis ≤3 cm per CT detectis. Examen adenocarcinomatis pulmonis stadii I. Panel metabolitorum sericum identificavimus qui adenocarcinoma pulmonis a nodulis benignis et subiectis sanis distinguunt. Analysis locupletationis semitarum revelavit metabolismum tryptophani et glucosi abnormalem alterationes communes in adenocarcinoma pulmonis comparato cum nodulis benignis et subiectis sanis esse. Denique, classificatorem metabolicum serum magnae specificitatis et sensibilitatis ad distinguendum inter nodulos pulmonares malignos et benignos per LDCT detectos constituimus et comprobavimus, quod in diagnosi differentiali praecoci et aestimatione periculi auxilium ferre potest.
In hoc studio, exempla serorum secundum sexum et aetatem comparata retrospective collecta sunt a 174 subiectis sanis, 292 aegris cum nodulis pulmonalibus benignis, et 229 aegris cum adenocarcinoma pulmonis stadii I. Characteres demographici 695 subiectorum in Tabula Supplementi 1 monstrantur.
Ut in Figura 1a demonstratur, in Centro Cancri Universitatis Sun Yat-sen summa 480 exempla serorum, inter quae 174 exempla testium sanorum (HC), 170 noduli benigni (BN), et 136 exempla adenocarcinomatis pulmonis (LA) stadii I, collecta sunt. Cohors inventionis pro delineatione metabolomica non designata utens chromatographia liquida ultra-performance-spectrometria massae altae resolutionis (UPLC-HRMS). Ut in Figura Supplementi 1 demonstratur, metaboliti differentiales inter LA et HC, LA et BN identificati sunt ad exemplar classificationis constituendum et ulterius explorandam analysin viarum differentialium. 104 exempla a Centro Cancri Universitatis Sun Yat-sen collecta et 111 exempla a duobus aliis nosocomiis collecta validationi internae et externae, respective, subiecta sunt.
a Populatio studii in cohorte inventionis quae analysin metabolomicam serorum globalem subiit utens chromatographia liquida ultra-performance-spectrometria massae altae resolutionis (UPLC-HRMS). b Analysis discriminans quadratorum minimorum partialis (PLS-DA) metabolomis totius 480 exemplorum serorum ex cohorte studii, inclusis subiectis sanis (HC, n = 174), nodulis benignis (BN, n = 170), et adenocarcinomate pulmonis stadii I (Los Angeles, n = 136). +ESI, modus ionizationis electrospray positivus, -ESI, modus ionizationis electrospray negativus. c–e Metabolitae cum abundantiis significanter diversis in duobus gregibus datis (test ordinis Wilcoxon bicaudatum, valor p adaptatus pro rata inventionis falsae, FDR <0.05) rubro (mutatione plica > 1.2) et caeruleo (mutatione plica < 0.83) monstrantur. ) in graphico vulcano monstratae. f Tabula caloris coacervationis hierarchicae differentias significantes in numero metabolitorum annotatorum inter LA et BN ostendens. Data originalia in forma fasciculorum datorum originalium praebentur.
Metaboloma sericum totum 174 HC, 170 BN et 136 LA in grege inventionis per UPLC-HRMS analysatum est. Primo demonstramus exempla moderationis qualitatis (QC) arcte in centro exemplaris analysis principalis componentis (PCA) non supervisae congregari, stabilitatem effectus studii praesentis confirmantes (Figura Supplementaria 2).
Ut in analysi discriminante quadratorum minimorum partiali (PLS-DA) in Figura 1b demonstratur, invenimus differentias claras inter LA et BN, LA et HC in modis ionizationis electrospray positivo (+ESI) et negativo (-ESI) isolatis. Nihilominus, nullae differentiae significantes inter BN et HC in condicionibus +ESI et -ESI inventae sunt.
Invenimus 382 differentias inter LA et HC, 231 differentias inter LA et BN, et 95 differentias inter BN et HC (probatio ordinis signati Wilcoxon, FDR <0.05 et mutatio multiplex >1.2 vel <0.83) (Figura .1c-e). Cacumina ulterius annotata sunt (Data Supplementaria 3) contra basim datorum (bibliotheca mzCloud/HMDB/Chemspider) per valorem m/z, tempus retentionis et investigationem fragmentationis spectri massae (singula descripta in sectione Methodorum)22. Denique, 33 et 38 metaboliti annotati cum differentiis significantibus in abundantia identificati sunt pro LA contra BN (Figura 1f et Tabula Supplementaria 2) et LA contra HC (Figura Supplementaria 3 et Tabula Supplementaria 2), respective. Contra, tantum 3 metaboliti cum differentiis significantibus in abundantia identificati sunt in BN et HC (Tabula Supplementaria 2), congruens cum congruentia inter BN et HC in PLS-DA. Hi metaboliti differentiales latam biochemicarum varietatem comprehendunt (Figura Suppletoria 4). Haec omnia simul sumpta mutationes significantes in metaboloma serico demonstrant, quae transformationem malignam cancri pulmonis in stadio initiali, comparati cum nodulis pulmonalibus benignis vel subiectis sanis, reflectunt. Interea, similitudo metabolomis serici BN et HC suggerit nodulos pulmonares benignos multas notas biologicas cum individuis sanis communicare posse. Cum mutationes geni receptoris factoris crescentis epidermalis (EGFR) communes sint in adenocarcinomate pulmonis subtypo 23, impulsum mutationum impulsivarum in metaboloma serico determinare quaesivimus. Deinde profile metabolomicum generale 72 casuum cum statu EGFR in grege adenocarcinomatis pulmonis analyzavimus. Interesse est quod profiles comparabiles inter aegros cum mutatione EGFR (n = 41) et aegros cum typo naturali EGFR (n = 31) in analysi PCA invenimus (Figura Suppletoria 5a). Attamen, septem metabolitas, quorum abundantia significanter mutata est in aegris cum mutatione EGFR comparatis cum aegris cum EGFR naturali (test t, p < 0.05 et mutatio multiplicis > 1.2 vel < 0.83) (Figura Supplementaria 5b), invenimus. Plerique horum metabolitarum (quinque ex septem) sunt acylcarnitina, quae munus magnum agunt in viis oxidationis acidorum pinguium.
Ut in processu operis in Figura 2a monstrato illustratur, bioindices ad classificationem nodulorum obtenti sunt utens operatoribus minimae contractionis absolutae et selectione fundata in 33 metabolitis differentialibus in LA (n = 136) et BN (n = 170) identificatis. Optima combinatio variabilium (LASSO) – exemplar regressionis logisticae binariae. Validatio decupla adhibita est ad firmitatem exempli probandam. Selectio variabilium et regularizatio parametrorum poena maximizationis probabilitatis cum parametro λ24 adaptantur. Analysis metabolomica globalis ulterius independenter peracta est in gregibus validationis internae (n = 104) et validationis externae (n = 111) ad perfunctionem classificationis exempli discriminantis probandam. Proinde, 27 metaboliti in grege inventionis identificati sunt ut optimum exemplar discriminans cum maximo valore AUC medio (Fig. 2b), inter quos 9 activitatem auctam et 18 activitatem diminutam in LA comparato cum BN habebant (Fig. 2c).
Ordo operis ad classificatorem nodulorum pulmonalium construendum, incluso selectione optimae tabulae metabolitorum serorum in grege inventionis utens modello regressionis logisticae binariae per validationem decuplam et aestimatione effectus praedictivi in gregibus validationis internis et externis. b Statisticae validationis cruciatae gregis regressionis LASSO pro selectione biosignatorum metabolicorum. Numeri supra dati numerum medium biosignatorum selectorum ad λ datum repraesentant. Linea punctata rubra valorem AUC medium ad lambda correspondentem repraesentat. Vectes erroris griseae valores AUC minimos et maximos repraesentant. Linea punctata optimum exemplar cum 27 biosignatoribus selectis indicat. AUC, area sub curva characteristicae operantis receptoris (ROC). c Mutationes complicatae 27 metabolitorum selectorum in grege LA comparatis cum grege BN in grege inventionis. Columna rubra – activatio. Columna caerulea est declinatio. d–f Curvae characteristicae operantis receptoris (ROC) potentiam exemplaris discriminantis ostendentes, fundatae in 27 combinationibus metabolitorum in gregibus validationis inventionis, internis et externis. Data fontis in forma fasciculorum datorum fontis praebentur.
Exemplar praedictionis creatum est, fundatum in coefficientibus regressionis ponderatis horum 27 metabolitorum (Tabula Suppletoria 3). Analysis ROC, his 27 metabolitis innixa, valorem areae sub curva (AUC) 0.933, sensibilitatem gregis inventionis 0.868, et specificitatem 0.859 protulit (Figura 2d). Interea, inter 38 metabolitos differentiales annotatos inter LA et HC, series 16 metabolitorum AUC 0.902 cum sensibilitate 0.801 et specificitate 0.856 in discriminando LA ab HC consecuta est (Figura Suppletoria 6a-c). Valores AUC, in diversis liminibus mutationis multiplicis pro metabolitis differentialibus fundati, etiam comparati sunt. Invenimus exemplar classificationis optime fungi in discriminando inter LA et BN (HC) cum gradus mutationis multiplicis ad 1.2 contra 1.5 vel 2.0 constitutus esset (Figura Suppletoria 7a,b). Exemplar classificationis, in XXVII coetibus metabolitorum fundatum, ulterius in cohortibus internis et externis validatum est. AUC erat 0.915 (sensitivitas 0.867, specificitas 0.811) pro validatione interna et 0.945 (sensitivitas 0.810, specificitas 0.979) pro validatione externa (Fig. 2e, f). Ad efficientiam interlaboratoriam aestimandam, XL exempla ex cohorte externa in laboratorio externo analysata sunt, ut in sectione Methodorum descriptum est. Accuratio classificationis AUC 0.925 attigit (Figura Suppletoria 8). Quia carcinoma squamosum pulmonis (LUSC) secundum subtypum frequentissimum cancri pulmonis non parvocellularis (NSCLC) post adenocarcinoma pulmonis (LUAD) est, etiam utilitatem potentialem validatam profilium metabolicorum probavimus. BN et XVI casus LUSC. AUC discriminationis inter LUSC et BN erat 0.776 (Figura Suppletoria 9), facultatem deteriorem comparatam cum discriminatione inter LUAD et BN indicans.
Studia demonstraverunt magnitudinem nodulorum in imaginibus tomographiae computatae (CT) positive conexam esse cum probabilitate malignitatis et manere determinantem maiorem curationis nodulorum25,26,27. Analysis datorum ex magna cohorte studii NELSON demonstravit periculum malignitatis in subiectis cum nodis <5 mm etiam simile esse ei in subiectis sine nodis28. Ergo, minima magnitudo quae monitorium CT regularem requirit est 5 mm, ut commendatur a Societate Thoracica Britannica (BTS), et 6 mm, ut commendatur a Societate Fleischneriana29. Attamen, noduli maiores quam 6 mm et sine manifestis notis benignis, noduli pulmonares indeterminati (IPN) appellati, manent provocatio maior in aestimatione et curatione in praxi clinica30,31. Deinde examinavimus utrum magnitudo nodulorum signaturas metabolomicas afficeret, utens exemplis collectis ex cohortibus inventionis et validationis internae. In 27 bioindices validati intendentes, primum perfiles PCA metabolomatum HC et BN sub-6 mm comparavimus. Invenimus pleraque data pro HC et BN se imbricasse, demonstrantes similes gradus metabolitorum serorum in utroque grege fuisse (Fig. 3a). Tabulae proprietatum per diversas magnitudinum amplitudines conservatae manebant in BN et LA (Fig. 3b, c), dum separatio inter nodulos malignos et benignos in ambitu 6-20 mm observata est (Fig. 3d). Haec cohors AUC 0.927, specificitatem 0.868, et sensibilitatem 0.820 ad praedicendam malignitatem nodulorum 6 ad 20 mm mensurantium habuit (Fig. 3e, f). Nostrae conclusiones ostendunt classificatorem mutationes metabolicas a transformatione maligna praematura causatas capere posse, magnitudine noduli non obstante.
ad Comparatio profilorum PCA inter greges specificatos secundum classificatorem metabolicum 27 metabolitorum. CC et BN < 6 mm. b BN < 6 mm contra BN 6–20 mm. in LA 6–20 mm contra LA 20–30 mm. g BN 6–20 mm et LA 6–20 mm. GC, n = 174; BN < 6 mm, n = 153; BN 6–20 mm, n = 91; LA 6–20 mm, n = 89; LA 20–30 mm, n = 77. e Curva characteristici operantis receptoris (ROC) ostendens effectum exemplaris discriminantis pro nodulis 6–20 mm. f Valores probabilitatis calculati sunt secundum exemplar regressionis logisticae pro nodulis 6–20 mm metientibus. Linea grisea punctata valorem liminis optimum (0.455) repraesentat. Numeri supra repraesentant percentage casuum proiectorum pro Los Angeles. Utere examine t Studentis bilaterali. PCA, analysis componentium principalium. AUC area sub curva. Data fontis in forma fasciculorum datorum fontis praebentur.
Quattuor exempla (annorum 44–61 aetatis) cum similibus magnitudinibus nodulorum pulmonalium (7–9 mm) porro selecta sunt ad illustrandam efficaciam exempli praedictionis malignitatis propositi (Fig. 4a, b). In primo examine, Casus 1 se praebuit ut nodulus solidus cum calcificatione, nota cum benignitate coniuncta, dum Casus 2 se praebuit ut nodulus indeterminatus partim solidus sine ullis notis benignis manifestis. Tres circuitus tomographiae computatae subsequentes demonstraverunt hos casus stabiles mansisse per spatium quattuor annorum et ideo noduli benigni habiti esse (Fig. 4a). Comparata cum aestimatione clinica tomographiae computatae seriatae, analysis metabolitorum serorum unius iactus cum exemplo classificatoris currenti celeriter et recte hos nodulos benignos identificavit secundum restrictiones probabilisticas (Tabula 1). Figura 4b in casu 3 nodulum cum signis retractionis pleuralis ostendit, quae saepissime cum malignitate coniungitur32. Casus 4 se praebuit ut nodulus indeterminatus partim solidus sine ullo indicio causae benignae. Omnes hi casus secundum exemplar classificatoris maligni praedicti sunt (Tabula 1). Aestimatio adenocarcinomatis pulmonis per examen histopathologicum post chirurgiam resectionis pulmonis demonstrata est (Figura 4b). Pro validatione externa, classificator metabolicus accurate duos casus nodulorum pulmonalium indeterminatorum maiorum quam 6 mm praedixit (Figura Supplementaria 10).
Imagines tomographiae computatae (CT) fenestrae axialis pulmonum duorum casuum nodulorum benignorum. In casu 1, tomographia computata post annos quattuor nodulum solidum stabilem 7 mm cum calcificatione in lobo inferiore dextro ostendit. In casu 2, tomographia computata post annos quinque nodulum stabilem, partim solidum, diametro 7 mm in lobo superiore dextro ostendit. b Imagines tomographiae computatae fenestrae axialis pulmonum et studia pathologica correspondentia duorum casuum adenocarcinomatis stadii I ante resectionem pulmonis. Casus 3 nodulum diametro 8 mm in lobo superiore dextro cum retractione pleurali ostendit. Casus 4 nodulum partim solidum vitreum tritum 9 mm in lobo superiore sinistro ostendit. Coloratio haematoxylino et eosino (H&E) textus pulmonis resecti (scala = 50 μm) demonstrans exemplar accretionis acinaris adenocarcinomatis pulmonis. Sagittae nodulos in imaginibus CT detectos indicant. Imagines H&E sunt imagines repraesentativae multiplicium (>3) camporum microscopicorum a pathologo examinatorum.
Nostrae conclusiones simul sumptae potentialem utilitatem bioindicatorum metabolitorum serorum in diagnosi differentiali nodulorum pulmonalium demonstrant, quae difficultates creare possunt cum examen tomographiae computatae aestimatur.
Innixi tabula metabolitorum differentialium validata, correlatos biologicos mutationum metabolicarum maiorum identificare quaesivimus. Analysis locupletationis semitarum KEGG a MetaboAnalyst facta sex semitas communes significanter mutatas inter duos greges datos (LA contra HC et LA contra BN, p ≤ 0.001 adaptatum, effectus > 0.01) identificavit. Hae mutationes perturbationibus in metabolismo pyruvati, metabolismo tryptophani, metabolismo niacini et nicotinamidi, glycolysi, cyclo TCA, et metabolismo purini notatae sunt (Fig. 5a). Deinde metabolomicam directam ulterius perfecimus ad mutationes maiores verificandas utens quantificatione absoluta. Determinatio metabolitorum communium in semitis communiter mutatis per spectrometriam massae triplicem quadrupolum (QQQ) utens normis metabolitorum authenticis. Characteres demographici exempli destinati studii metabolomici in Tabula Supplementi 4 continentur. Congruenter cum nostris resultatibus metabolomicis globalibus, analysis quantitativa confirmavit hypoxanthinum et xanthinum, pyruvatum, et lactatum in LA aucta esse comparatis cum BN et HC (Fig. 5b, c, p <0.05). Nihilominus, nullae differentiae significantes in his metabolitis inter BN et HC inventae sunt.
Analysis locupletationis viae KEGG metabolitorum significanter diversorum in grege LA comparatis cum gregibus BN et HC. Test Global bilaterale adhibitum est, et valores p methodo Holm-Bonferroni adaptati sunt (p adaptato ≤ 0.001 et magnitudo effectus > 0.01). b–d Diagrammata violini ostendentia gradus hypoxanthini, xanthini, lactati, pyruvati, et tryptophani in seris HC, BN, et LA determinatis per LC-MS/MS (n = 70 per gregem). Lineae punctatae albae et nigrae medianam et quartile respective indicant. e Diagramma violini ostendens expressionem mRNA Log2TPM (transcripta per million) normalizatam SLC7A5 et QPRT in adenocarcinoma pulmonis (n = 513) comparatam cum tela pulmonis normali (n = 59) in indice datorum LUAD-TCGA. Arca alba ambitum interquartilem repraesentat, linea nigra horizontalis in centro medianam repraesentat, et linea nigra verticalis a arca extensa intervallum fiduciae 95% (CI) repraesentat. f Diagramma correlationis Pearsonianae expressionis SLC7A5 et GAPDH in adenocarcinoma pulmonis (n = 513) et tela pulmonis normali (n = 59) in indice TCGA. Area grisea CI 95% repraesentat. r, Coefficiens correlationis Pearsonianae. g Gradus tryptophani cellularis normalizati in cellulis A549 transfectis cum shRNA moderatore nonspecifico (NC) et shSLC7A5 (Sh1, Sh2) determinati per LC-MS/MS. Analysis statistica quinque exemplorum biologice independentium in quoque grege praesentatur. h Gradus cellulares NADt (NAD totalis, NAD+ et NADH inclusis) in cellulis A549 (NC) et cellulis A549 SLC7A5 knockdown (Sh1, Sh2). Analysis statistica trium exemplorum biologice independentium in quoque grege praesentatur. Actio glycolytica cellularum A549 ante et post suppressionem SLC7A5 per acidificationis extracellularis ratem (ECAR) mensurata est (n = 4 exempla biologice independentia per gregem). 2-DG,2-deoxy-D-glucosum. Test t Studentis bilaterale in (b-h) adhibitum est. In (g-i), virgae erroris mediam ± deviationem standardem (SD) repraesentant, unumquodque experimentum ter independenter peractum est et eventus similia erant. Data fontis in forma fasciculorum datorum fontis praebentur.
Considerantes magnum impulsum metabolismi tryptophani mutati in grege LA, etiam gradus tryptophani in sero in gregibus HC, BN, et LA per QQQ aestimavimus. Invenimus tryptophanum in sero in LA imminutum esse comparatum cum HC vel BN (p < 0.001, Figura 5d), quod congruit cum inventis prioribus quae gradus tryptophani circulantis inferiores esse in aegris cum cancro pulmonis quam in subiectis sanis ex grege controlli33,34,35. Aliud studium utens PET/CT indicatore 11C-methyl-L-tryptophan invenit tempus retentionis signi tryptophani in textu cancri pulmonis significanter auctum esse comparatum cum laesionibus benignis vel textu normali36. Hypothesim ponimus diminutionem tryptophani in sero LA absorptionem activam tryptophani a cellulis cancri pulmonis reflectere posse.
Notum est etiam productum finale viae kynureninae catabolismi tryptophani esse NAD+37,38, quod est substratum grave reactionis glyceraldehydi-3-phosphatis cum 1,3-bisphosphoglycerato in glycolysi39. Dum studia priora in munere catabolismi tryptophani in regulatione immunitatis intenta sunt, nos interactionem inter dysregulationem tryptophani et vias glycolyticas in hoc studio observatas elucidare quaesivimus. Familia transportatorum solutorum 7 membrum 5 (SLC7A5) transportator tryptophani esse notum est43,44,45. Phosphoribosyltransferasis acidi quinolinici (QPRT) est enzymum infra viam kynureninam situm quod acidum quinolinicum in NAMN46 convertit. Inspectio datorum LUAD TCGA revelavit et SLC7A5 et QPRT significanter auctas esse in textu tumoris comparatis cum textu normali (Fig. 5e). Haec augmentatio in stadiis I et II necnon III et IV adenocarcinomatis pulmonis observata est (Figura Supplementaria 11), perturbationes praecoces in metabolismo tryptophani cum tumorigenesi consociatas indicans.
Praeterea, collectio datorum LUAD-TCGA correlationem positivam inter expressionem mRNA SLC7A5 et GAPDH in exemplaribus aegrotorum cancro laborantium ostendit (r = 0.45, p = 1.55E-26, Figura 5f). Contra, nulla correlatio significativa inter tales signaturas genorum in tela pulmonis normali inventa est (r = 0.25, p = 0.06, Figura 5f). Repressio SLC7A5 (Figura Supplementaria 12) in cellulis A549 significanter gradus tryptophani et NAD(H) cellularis reduxit (Figura 5g,h), attenuationem activitatis glycolyticae effecit, ut per ratem acidificationis extracellularis (ECAR) mensuratum est (Figura 1). 5i). Ergo, fundati in mutationibus metabolicis in sero et detectione in vitro, hypothesim ponimus metabolismum tryptophani NAD+ per viam kynureninae producere et munus grave in glycolysi promovenda in cancro pulmonis agere posse.
Studia demonstraverunt magnum numerum nodulorum pulmonalium indeterminatorum per tomographiam computatam dextrorsum (LDCT) detectorum necessitatem probationum additionalium, ut PET-CT, biopsiae pulmonis, et curationis excessivae, propter diagnosim falso positivam malignitatis, ducere posse.31 Ut in Figura 6 demonstratur, studium nostrum seriem metabolitorum serorum cum potentiali valore diagnostico, quae stratificationem periculi et subsequentem curationem nodulorum pulmonalium per tomographiam computatam detectorum emendare potest, invenit.
Noduli pulmonales per tomographiam computatam dosis humilis (LDCT) aestimantur, cum notis imaginum causas benignas vel malignas suggerentibus. Exitus incertus nodulorum ad visitationes subsequentes frequentes, interventiones inutiles, et curationem excessivam ducere potest. Inclusio classificatorum metabolicorum serorum cum valore diagnostico aestimationem periculi et subsequentem curationem nodulorum pulmonalium emendare potest. Tomographia emissionis positronis PET.
Data ex studio NLST Americano et studio NELSON Europaeo suggerunt ut perscrutatio coetuum periculi alti per tomographiam computatam dosis humilis (LDCT) mortalitatem ex cancro pulmonis minuere possit1,3. Attamen, aestimatio periculi et subsequens curatio clinica magni numeri nodulorum pulmonalium incidentium per LDCT detectorum manent difficillimae. Finis principalis est classificationem rectam protocollorum existentium in LDCT fundatorum optimizare per incorporationem bioindicatorum fidorum.
Quaedam signa molecularia, ut metabolitae sanguinis, per comparationem cancri pulmonis cum subiectis sanis identificata sunt15,17. In hoc studio, in applicatione analysis metabolomicae sericae ad distinguendum inter nodulos pulmonares benignos et malignos per tomographiam dextrographiae laparoscopicae depressae (LDCT) intenti sumus. Metaboloma sericum globale subiecti sani (HC), nodulorum pulmonarium benignorum (BN), et exemplorum adenocarcinomatis pulmonis (LA) stadii I per analysin UPLC-HRMS comparavimus. Invenimus HC et BN similia perfiles metabolicos habere, dum LA mutationes significantes comparata cum HC et BN demonstravit. Duo genera metabolitarum sericarum quae LA ab HC et BN distinguunt, identificavimus.
Ratio hodierna identificationis nodulorum benignorum et malignorum, quae per LDCT innititur, praecipue in magnitudine, densitate, morphologia et celeritate crescentiae nodulorum per tempus fundatur30. Studia priora demonstraverunt magnitudinem nodulorum arcte cum probabilitate cancri pulmonis coniunctam esse. Etiam in aegris periculi alti, periculum malignitatis in nodulis <6 mm est <1%. Periculum malignitatis pro nodulis 6 ad 20 mm metientibus ab 8% ad 64% variat30. Quapropter, Societas Fleischner diametrum liminalem 6 mm ad cotidianam tomographiam computatam (CT) observationem commendat.29 Attamen, aestimatio periculi et tractatio nodulorum pulmonalium indeterminatorum (IPN) maiorum quam 6 mm non sufficienter peractae sunt31. Tractatio hodierna morbi cordis congeniti plerumque innititur vigilantiae exspectationis cum frequenti monitorio CT.
Metabolomate validato innixi, primum demonstravimus intersectionem signorum metabolomicorum inter individua sana et nodulos benignos <6 mm. Similitudo biologica congruit cum prioribus inventis tomographiae computatae (CT), quae dicunt periculum malignitatis pro nodulis <6 mm tam humile esse quam pro subiectis sine nodis.30 Notandum est nostras conclusiones etiam demonstrare nodulos benignos <6 mm et ≥6 mm magnam similitudinem in profilibus metabolomicis habere, quod suggerit definitionem functionalem aetiologiae benignae congruere, magnitudine noduli non obstante. Itaque modernae tabulae diagnosticae metabolitorum serorum unum experimentum praebere possunt ut experimentum excludendi cum noduli initialiter in CT deteguntur et potentialiter monitorationem serialem reducere. Simul, eadem tabula biosignatorum metabolicorum nodulos malignos ≥6 mm magnitudinis a nodulis benignis distinxit et praedictiones accuratas pro nodulis intervertebralibus (IPN) magnitudinis similis et notis morphologicis ambiguis in imaginibus CT praebuit. Hic classificator metabolismi serorum bene perfecit in praedicenda malignitate nodulorum ≥6 mm cum AUC 0.927. Nostrae conclusiones simul sumptae indicant singulares signaturas metabolomicas sericas mutationes metabolicas a tumore inductas praemature speciatim reflectere posse et valorem potentialem habere ut praedictores periculi, independentes a magnitudine noduli.
Notandum est adenocarcinoma pulmonis (LUAD) et carcinoma cellulae squamosae (LUSC) esse genera principalia cancri pulmonis non parvicellularis (NSCLC). Cum LUSC arcte cum usu tabaci coniunctum sit47 et LUAD sit histologia frequentissima nodulorum pulmonum incidentium in examine tomographiae computatae detectorum48, exemplar nostrum classificatoris specialiter constructum est pro exemplaribus adenocarcinomatis stadii I. Wang et collegae etiam in LUAD intendebant et novem signaturas lipidorum utentes lipidomica ad distinguendum cancrum pulmonis stadii incipientis ab individuis sanis identificaverunt17. Exemplar classificatoris hodiernum in 16 casibus LUSC stadii I et 74 nodulis benignis probavimus et accuratam praedictionis LUSC humilem (AUC 0.776) observavimus, quod suggerit LUAD et LUSC proprias signaturas metabolomicas habere posse. Re vera, LUAD et LUSC demonstratum est differre in aetiologia, origine biologica et aberrationibus geneticis49. Quapropter, alia genera histologiae in exemplis exercitationis ad detectionem cancri pulmonis in populationibus in programmatibus examinandi includi debent.
Hic, sex vias frequentissime mutatas in adenocarcinoma pulmonis, comparatis cum subiectis sanis et nodulis benignis, identificavimus. Xanthinum et hypoxanthinum metabolitae communes viae metabolicae purini sunt. Congruenter cum nostris resultatis, intermedia cum metabolismo purini associata significanter aucta sunt in sero vel textibus aegrotorum cum adenocarcinoma pulmonis, comparatis cum subiectis sanis vel aegrotis in stadio praeinvasivo15,50. Elevatae gradus xanthini et hypoxanthini in sero anabolismum, quod a cellulis cancri celeriter proliferantibus requiritur, reflectere possunt. Dysregulatio metabolismi glucosi est nota nota metabolismi cancri51. Hic, augmentum significans pyruvati et lactati in grege LA comparato cum grege HC et BN observavimus, quod congruit cum relationibus prioribus de abnormalitatibus viae glycolyticae in profile metabolomis serici aegrotorum cum cancro pulmonis non parvocellulari (NSCLC) et subiectis sanis. Resultata congruunt52,53.
Magni momenti est quod correlationem inversam inter metabolismum pyruvati et tryptophani in sero adenocarcinomatum pulmonum observavimus. Gradus tryptophani in sero in grege LA reducti sunt comparati cum grege HC vel BN. Interesse est quod studium prius magnae scalae utens cohorte prospectiva invenit gradus humiles tryptophani circulantis cum aucto periculo cancri pulmonis coniunctos esse [54]. Tryptophanum est aminoacidum essentiale quod ex cibo omnino accipimus. Concludimus depletionem tryptophani in sero in adenocarcinoma pulmonis fortasse celerem depletionem huius metaboliti reflectere. Bene notum est productum finale catabolismi tryptophani per viam kynureninae fontem esse synthesis NAD+ de novo. Quia NAD+ praecipue per viam recuperationis producitur, momentum NAD+ in metabolismo tryptophani in salute et morbo determinandum adhuc est [46]. Nostra analysis datorum TCGA demonstravit expressionem transportatoris tryptophani soluti 7A5 (SLC7A5) significanter auctam esse in adenocarcinoma pulmonis comparata cum subiectis normalibus et positive correlatam esse cum expressione enzymi glycolytici GAPDH. Studia priora imprimis in munere catabolismi tryptophani in suppressione responsionis immunis antitumoralis intenta sunt40,41,42. Hic demonstramus inhibitionem absorptionis tryptophani per suppressionem SLC7A5 in cellulis cancri pulmonis subsequentem diminutionem in gradibus NAD cellularibus et concomitantem attenuationem activitatis glycolyticae efficere. In summa, nostrum studium basin biologicam praebet pro mutationibus in metabolismo serico cum transformatione maligna adenocarcinomatis pulmonis consociatis.
Mutationes EGFR sunt mutationes impulsivae frequentissimae in aegrotis cum NSCLC. In nostro studio, invenimus aegrotos cum mutatione EGFR (n = 41) perfiles metabolomicos generales similes aegrotis cum EGFR typo naturali (n = 31) habuisse, quamquam invenimus gradus sericos imminutos aliquorum aegrotorum EGFR mutantium in aegrotis acylcarnitino. Munus acylcarnitinorum stabilitum est transportare greges acyl e cytoplasmate in matricem mitochondrialem, quod ad oxidationem acidorum pinguium ducit ad energiam producendam 55. Congruenter cum nostris inventis, studium recens etiam perfiles metabolomicos similes inter tumores EGFR mutantes et EGFR typi naturalis identificavit per analysin metabolomici globalis 102 exemplorum textuum adenocarcinomatis pulmonis 50. Interesse est quod contentum acylcarnitini etiam in grege mutante EGFR inventum est. Ergo, utrum mutationes in gradibus acylcarnitini mutationes metabolicas ab EGFR inductas et vias moleculares subiacentes reflectant, ulteriore studio mereri potest.
In conclusione, studium nostrum classificatorem metabolicum serum ad diagnosin differentialem nodulorum pulmonalium constituit et modum operandi proponit qui aestimationem periculi optimizare et administrationem clinicam in examine tomographiae computatae (CT) facilitare potest.
Hoc studium a Commissione Ethica Nosocomii Cancri Universitatis Sun Yat-sen, Nosocomio Primo Affiliato Universitatis Sun Yat-sen, et Commissione Ethica Nosocomii Cancri Universitatis Zhengzhou approbatum est. In coetibus inventionis et validationis internae, 174 sera ab individuis sanis et 244 sera ex nodulis benignis collecta sunt ab individuis examinationes medicas annuas in Departamento Moderationis et Praeventionis Cancri, Centro Cancri Universitatis Sun Yat-sen, subeuntibus, et 166 serum nodulorum benignorum. Adenocarcinomata pulmonum stadii I ex Centro Cancri Universitatis Sun Yat-sen collecta sunt. In cohorte validationis externae, 48 casus nodulorum benignorum, 39 casus adenocarcinomatis pulmonis stadii I ex Nosocomio Primo Affiliato Universitatis Sun Yat-sen, et 24 casus adenocarcinomatis pulmonis stadii I ex Nosocomio Cancri Zhengzhou fuerunt. Centrum Cancri Universitatis Sun Yat-sen etiam sedecim casus cancri pulmonis squamosi cellularis stadii I collegit ad facultatem diagnosticam classificatoris metabolici constituti explorandam (proprietates aegrotorum in Tabula Supplementi 5 monstrantur). Exempla ex cohorte inventionis et cohorte validationis internae inter Ianuarium 2018 et Maium 2020 collecta sunt. Exempla pro cohorte validationis externae inter Augustum 2021 et Octobrem 2022 collecta sunt. Ad praeiudicium generis minuendum, numeri fere aequales casuum masculinorum et femininorum cuique cohorti assignati sunt. Turma Inventionis et Turma Revisionis Internae. Genus participantium determinatum est secundum relationem sui ipsius. Consensus informatus ab omnibus participantibus obtentus est et nulla compensatio praebita est. Subiecta cum nodulis benignis erant ii cum stabili indice tomographiae computatae post 2 ad 5 annos tempore analysis, excepto uno casu ex exemplo validationis externae, quod ante operationem collectum et per histopathologiam diagnoscitum est. Excepto bronchitide chronica. Casus adenocarcinomatis pulmonis ante resectionem pulmonis collecti et per diagnosim pathologicam confirmati sunt. Exempla sanguinis ieiuni in tubis separationis seri sine ullis anticoagulantibus collecta sunt. Exempla sanguinis per horam unam ad temperaturam ambientem coagulata sunt, deinde ad 2851 × g per decem minuta ad 4°C centrifugata sunt ut supernatans seri colligeretur. Partes seri ad -80°C usque ad extractionem metaboliti congelatae sunt. Departmentum Praeventionis Cancri et Examinationis Medicae Centri Cancri Universitatis Sun Yat-sen copiam seri a 100 donatoribus sanis collegit, inter quos par numerus virorum et mulierum aetatis 40 ad 55 annorum. Volumen aequale cuiusque exempli donatoris mixtum est, copia inde resultans in portionibus divisa et ad -80°C conservata est. Mixtura seri ut materia referentialis ad qualitatem inspiciendam et uniformationem datorum adhibita est.
Serum referentiale et exempla probationis liquefacta sunt, et metabolitae extractae sunt methodo extractionis composita (MTBE/methanolum/aqua) 56. Breviter, 50 μl seri mixta sunt cum 225 μl methanoli glaciali et 750 μl methyl tert-butyl aetheris (MTBE) glaciali. Mixturam agita et in glacie per horam unam incuba. Exempla deinde mixta et vortice mixta sunt cum 188 μl aquae gradus MS continentis normas internas (13C-lactate, 13C3-pyruvate, 13C-methioninum, et 13C6-isoleucino, emptis a Cambridge Isotope Laboratories). Mixtura deinde centrifugata est ad 15,000 × g per 10 min ad 4°C, et phasis inferior translata est in duos tubos (125 μL singulos) ad analysin LC-MS in modis positivo et negativo. Denique, exemplum ad siccitatem evaporatum est in concentratore vacuo celerrimo.
Metabolitae siccatae in 120 μl acetonitrili 80% reconstitutae, per 5 min vortex agitatae, et per 10 min ad 15,000 × g ad 4°C centrifugatae sunt. Supernatantes in phialas vitreas fulvas cum microinsertis ad studia metabolomica translatae sunt. Analysis metabolomica sine designatione in suggestu chromatographiae liquidae ultra-performantiae-spectrometriae massae altae resolutionis (UPLC-HRMS) peracta est. Metabolitae separatae sunt utens systemate Dionex Ultimate 3000 UPLC et columna ACQUITY BEH Amide (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, Waters). In modo ion positivo, phases mobiles erant 95% (A) et 50% acetonitrili (B), quarum utraque 10 mmol/L ammonii acetati et 0.1% acidi formici continebat. In modo negativo, phases mobiles A et B 95% et 50% acetonitrili respective continebant, ambae phases 10 mmol/L ammonii acetati, pH = 9, continebant. Programma gradientium hoc modo erat: 0–0.5 min, 2% B; 0.5–12 min, 2–50% B; 12–14 min, 50–98% B; 14–16 min, 98% B; 16–16.1 min, 98–2% B; 16.1–20 min, 2% B. Columna ad 40°C et exemplum ad 10°C in autosampler conservata est. Fluxus celeritas 0.3 ml/min erat, volumen injectionis 3 μl erat. Spectrometrum massae Q-Exactive Orbitrap (Thermo Fisher Scientific) cum fonte ionizationis electrospray (ESI) in modo plenae scansionis operatum est et cum modo monitorio ddMS2 coniunctum est ad magnas copias datorum colligendas. Parametri MS sic constituti sunt: tensio sparsionis +3.8 kV/- 3.2 kV, temperatura capillaris 320°C, gas protegens 40 arb, gas auxiliaris 10 arb, temperatura calefactoris specilli 350°C, amplitudo scansionis 70–1050 m/h, resolutio .70 000. Data acquisita sunt utens Xcalibur 4.1 (Thermo Fisher Scientific).
Ad qualitatem datorum aestimandam, exempla qualitatis moderandae (QC) aggregata generata sunt per subtractionem 10 μL supernatantis ex quolibet exemplo. Sex injectiones exemplorum qualitatis moderandae initio sequentiae analyticae analysatae sunt ad stabilitatem systematis UPLC-MS aestimandam. Deinde exempla qualitatis moderandae periodiciter in gregem introducuntur. Omnes 11 greges exemplorum seri in hoc studio per LC-MS analysatae sunt. Aliquotae mixtionis seri aggregatae ex 100 donatoribus sanis ut materia referentialis in gregibus respectivis adhibitae sunt ad processum extractionis monitorandum et ad effectus inter greges accommodandos. Analysis metabolomica sine designatione cohortis inventionis, cohortis validationis internae, et cohortis validationis externae in Centro Metabolomico Universitatis Sun Yat-sen peracta est. Laboratorium externum Centri Analyseos et Probationum Universitatis Technologicae Guangdong etiam 40 exempla ex cohorte externa analysata est ad efficaciam exempli classificatoris probandam.
Post extractionem et reconstitutionem, quantitas absoluta metabolitorum serorum mensurata est utens chromatographia liquida ultra-altae efficaciae cum spectrometria massae tandem (Agilent 6495 triplici quadrupolo) cum fonte ionizationis electrospray (ESI) in modo monitorii reactionis multiplicis (MRM). Columna ACQUITY BEH Amidica (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, Waters) ad separandos metabolitos adhibita est. Phasis mobilis constabat ex 90% (A) et 5% acetonitrilo (B) cum 10 mmol/L ammonii acetati et 0.1% solutione ammoniae. Programma gradientium erat ut sequitur: 0–1.5 min, 0% B; 1.5–6.5 min, 0–15% B; 6.5–8 min, 15% B; 8–8.5 min, 15%–0% B; 8.5–11.5 min, 0%B. Columna ad 40°C et exemplum ad 10°C in autosampler conservata est. Fluxus celeritas 0.3 mL/min erat et volumen injectionis 1 μL. Parametri MS sic constituti sunt: tensio capillaris ±3.5 kV, pressio nebulizatoris 35 psi, fluxus gasis vaginae 12 L/min, temperatura gasis vaginae 350°C, temperatura gasis siccandi 250°C, et fluxus gasis siccandi 14 l/min. Conversiones MRM tryptophani, pyruvati, lactati, hypoxanthini et xanthini fuerunt 205.0–187.9, 87.0–43.4, 89.0–43.3, 135.0–92.3 et 151.0–107.9 respective. Data collecta sunt utens Mass Hunter B.07.00 (Agilent Technologies). Pro exemplaribus sericis, tryptophanum, pyruvatum, lactatum, hypoxanthinum, et xanthinum quantificati sunt per curvas calibrationis solutionum mixturarum normalium. Pro exemplaribus cellularum, contentum tryptophani ad normam internam et massam proteini cellularis normalizatum est.
Extractio apicis (m/z et tempus retentionis (RT)) peracta est utens Compound Discovery 3.1 et TraceFinder 4.0 (Thermo Fisher Scientific). Ad differentias potentiales inter greges eliminandas, quisque apex characteristicus exempli probati divisus est per apicem characteristicum materiae referentialis ex eadem grege ad abundantiam relativam obtinendam. Deviationes relativae standardum internorum ante et post standardizationem in Tabula Supplementi 6 monstrantur. Differentiae inter duos greges per falsam inventionem (FDR<0.05, Wilcoxon signed range test) et mutationem plicae (>1.2 vel <0.83) notatae sunt. Data MS cruda proprietatum extractarum et data MS sero referentiali correcta in Data Supplementi 1 et Data Supplementi 2 respective monstrantur. Annotatio apicis peracta est secundum quattuor gradus identificationis definitos, inter quos metabolita identificata, composita putative annotata, classes compositorum putative descriptas, et composita ignota 22. Secundum investigationes in basi datorum in Compound Discovery 3.1 (mzCloud, HMDB, Chemspider), composita biologica cum congruentibus MS/MS probatis vel annotationibus exactis in mzCloud (punctu > 85) vel Chemspider tandem selecta sunt ut intermedia inter metaboloma differentiale. Annotationes apicis pro singulis notis in Supplementariis Datis 3 includuntur. MetaboAnalyst 5.0 ad analysin univariatam abundantiae metabolitorum summa-normalizatorum adhibitus est. MetaboAnalyst 5.0 etiam analysin locupletationis semitae KEGG secundum metabolitos significanter differentes aestimavit. Analysis principalis componentium (PCA) et analysis discriminans quadratorum minimorum partialis (PLS-DA) analysatae sunt utens fasciculo programmatis ropls (v.1.26.4) cum normalizatione stack et autoscaling. Exemplar bioindicatoris metaboliti optimale ad malignitatem nodulorum praedicendam generatum est utens regressione logistica binaria cum minima contractione absoluta et operatore selectionis (LASSO, fasciculus R v.4.1-3). Efficacia exemplaris discriminantis in detectionis et validationis seriebus per aestimationem AUC secundum analysin ROC secundum fasciculum pROC (v.1.18.0.) descripta est. Limes probabilitatis optimus secundum indicem Youden maximum exemplaris (sensitivitas + specificitas – 1) obtentus est. Exempla cum valoribus minoribus vel maioribus quam limen praedicentur ut noduli benigni et adenocarcinoma pulmonis, respective.
Cellulae A549 (#CCL-185, American Type Culture Collection) in medio F-12K cum 10% FBS cultae sunt. Sequentiae shRNA (shRNA) SLC7A5 petentes et pars testis non petens (NC) in vectorem lentiviralem pLKO.1-puro insertae sunt. Sequentiae antisensae shSLC7A5 sunt hae: Sh1 (5′-GGAGAAACCTGATGAACAGTT-3′), Sh2 (5′-GCCGTGGACTTCGGGAACTAT-3′). Anticorpora ad SLC7A5 (#5347) et tubulinum (#2148) a Cell Signaling Technology empta sunt. Anticorpora ad SLC7A5 et tubulinum dilutione 1:1000 ad analysin Western blot adhibita sunt.
Examen Stressi Glycolyticum Seahorse XF gradus acidificationis extracellularis (ECAR) metitur. In experimento, glucosum, oligomycinum A, et 2-DG ordine administrata sunt ad capacitatem glycolyticam cellularem, per ECAR mensuratam, examinandam.
Cellulae A549 transfectae cum controlo non-directo (NC) et shSLC7A5 (Sh1, Sh2) per noctem in patellis 10 cm diametro sparsae sunt. Metabolitae cellulares extractae sunt cum 1 ml methanoli aquosi 80% glaciali. Cellulae in solutione methanoli abrasae, in novum tubum collectae, et centrifugatae sunt ad 15,000 × g per 15 min ad 4°C. Collige 800 µl supernatantis et sicca utens concentratore vacuo celerrimo. Deinde pellets metabolitarum siccatarum pro gradibus tryptophani analysatae sunt utens LC-MS/MS ut supra descriptum est. Gradus NAD(H) cellularis in cellulis A549 (NC et shSLC7A5) mensi sunt utens apparatu colorimetrico quantitativo NAD+/NADH (#K337, BioVision) secundum instructiones fabricatoris. Gradus proteinorum pro singulis exemplis mensi sunt ut quantitas metabolitarum normalizaretur.
Nullae methodi statisticae adhibitae sunt ad magnitudinem exempli praeliminariter determinandam. Priora studia metabolomica ad inventionem bioindicatorum15,18 destinata ut normae ad magnitudinem determinandam habita sunt, et his relationibus comparata, nostrum exemplum sufficiens erat. Nulla exempla ex cohorte studii exclusa sunt. Exempla serorum temere in cohortem inventionis (306 casus, 74.6%) et cohortem validationis internae (104 casus, 25.4%) pro studiis metabolomicis sine scopo assignata sunt. Etiam temere 70 casus ex quolibet cohorte ex serie inventionis pro studiis metabolomicis destinatis delegimus. Investigatores assignationem cohortis caeci erant per collectionem et analysin datorum LC-MS. Analyses statisticae datorum metabolomicorum et experimentorum cellularium in sectionibus Resultatorum, Legendarum Figurarum, et Methodorum respectivis describuntur. Quantificatio tryptophani cellularis, NADT, et activitatis glycolyticae ter independenter cum resultatibus identicis peracta est.
Plura de consilio studii, vide Summarium Relationis Portfolio Naturalis huic articulo coniunctum.
Data MS cruda proprietatum extractarum et data MS normalizata seri referentialis in Datis Supplementis 1 et Datis Supplementis 2 respective monstrantur. Annotationes apicorum pro proprietatibus differentialibus in Datis Supplementis 3 exhibentur. Collectio datorum LUAD TCGA ex https://portal.gdc.cancer.gov/ depromi potest. Data inputata ad graphum delineandum in datis fontibus praebentur. Data fontia pro hoc articulo praebentur.
Grex Studiorum Nationalis Examinationis Pulmonum, etc. Mortalitatem cancri pulmonis reducendo tomographia computata dosis humilis. Anglia Septentrionalis. J. Med. 365, 395–409 (2011).
Kramer, BS, Berg, KD, Aberle, DR et Prophet, PC. Examen cancri pulmonis utens tomographia computata helicali dosis humilis: eventus ex Studio Nationali Examinationis Pulmonalis (NLST). J. Med. Screen 18, 109–111 (2011).
De Koning, HJ, et al. Mortalitatem cancri pulmonis reducendo per examinationem tomographiae computatae volumetricae in experimento fortuito. Anglia Septentrionalis. J. Med. 382, 503–513 (2020).
Tempus publicationis: XVIII Septembris, MMXXIII